主要水生動物疫病病原學及檢疫技術研究——深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心研究成果

我國是世界水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量最多的國家之一，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有舉足輕重的地位，同時，水產(chǎn)貿(mào)易也是我國農(nóng)業(yè)創(chuàng)匯的重要支柱。深圳毗鄰香港，是連接國際和國內(nèi)的重要樞紐，每天有大量的水產(chǎn)品通關，因此深圳口岸也是重要水生動物疫病傳入和傳出的高風險地區(qū)。記入國際獸疫局（OIE）名錄中的水生動物病害有30多種，其中85%以上是病毒病。近年來，各個國家要求檢疫的病害種類越來越多，相關技術也在不斷提高。我國對水生動物疫病的研究，往往是在疫病已經(jīng)暴發(fā)或?qū)︷B(yǎng)殖業(yè)造成了相當大的危害后才開始，長期以來由于缺乏有效和規(guī)范的檢測方法，無法對這些疫病的發(fā)生進行有效監(jiān)測和預警，因此，對水生動物疫病病原進行研究和建立相應的檢測方法迫在眉睫。

“主要水生動物疫病病原學及檢疫技術研究”屬于國家質(zhì)檢總局科技計劃項目，由深圳出入境檢驗檢疫局動植物檢驗檢疫技術中心承擔。項目組在研究國內(nèi)外相關技術的基礎上，以威脅我國養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要水生動物病原作為研究對象，在病原學和基因組學研究的基礎上，建立了16種水生動物疫病的PCR或熒光PCR檢測方法以及高通量多重PCR檢測新技術，并制訂了相關標準，彌補了國內(nèi)在水生動物疫病檢測技術方面的空白。2002年以來，相關技術成果廣泛應用于國家農(nóng)業(yè)疫病防控部門，為國內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展提供了保障，促進了我國對外水產(chǎn)貿(mào)易的發(fā)展。該項目成果曾獲得2013年度中國水產(chǎn)學會范蠡科學技術獎二等獎

一、主要研究內(nèi)容

1．在國內(nèi)分離出鯉春病毒血癥病毒（SVCV）毒株，對所分離毒株的理化特性進行了研究，對SVCV國內(nèi)分離株進行了分子進化方面的研究，用酵母表達系統(tǒng)對SVCV國內(nèi)分離株糖蛋白基因進行了表達，對SVCV國內(nèi)分離株進行了基因組序列的測定和解析、細胞凋亡的初步研究以及細胞凋亡和RNA干擾的初步研究，建立了SVCV實時熒光PCR檢測技術。

2．KHV的分離和鑒定。開展了KHV的流行病學調(diào)查，實施了KHV在國內(nèi)感染情況的監(jiān)測活動，建立了KHV實時熒光PCR檢測方法，研發(fā)了KHV的 PCR快速檢測試劑盒。

3．建立了16種主要水生動物病毒高通量多重PCR和多重熒光PCR檢測平臺，研發(fā)了相關檢測試劑盒。

二、主要科技創(chuàng)新

1．鯉春病毒血癥病毒（SVCV）和錦鯉皰疹病毒（KHV）的分子生物學研究以及檢測試劑盒的研制和疫情調(diào)查

（1）首次在國內(nèi)從發(fā)病鯉魚分離出鯉春病毒血癥病毒的毒株，研究了SVCV毒株的敏感細胞和病毒粒子的理化特性及患鯉春病毒血癥的魚的組織病理學特點；對國內(nèi)分離株的全基因組進行測序和功能基因的解析；對國內(nèi)分離株進行了分子進化方面的研究；研究了病毒毒株感染宿主細胞的特性和引起細胞凋亡的機理；對病毒的囊膜糖蛋白基因進行了真核系統(tǒng)的表達，生產(chǎn)的蛋白為建立免疫學檢測方法奠定了基礎。

（2）首次從國內(nèi)發(fā)病魚體分離出錦鯉皰疹病毒；開展了錦鯉皰疹病毒在國內(nèi)養(yǎng)殖場的流行病學研究和錦鯉皰疹病毒病的監(jiān)測工作；在國內(nèi)建立了錦鯉皰疹病毒PCR和熒光PCR的檢測技術。

2．病原檢測的熒光PCR技術和多重熒光PCR技術

（1）在國內(nèi)首次建立了鯉春病毒血癥病毒、錦鯉皰疹病毒、魚傳染性造血器官壞死病毒、虹彩病毒蛙病毒屬、魚類神經(jīng)壞死病毒、斑點叉尾鮰病毒、殺鮭氣單胞菌、鮭魚腎桿菌、對蝦白斑綜合癥病毒、對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒、對蝦Taura綜合癥病毒和對蝦黃頭病毒的實時定量RT-PCR檢測方法，涉及六種魚類病毒病、兩種魚類細菌病和四種蝦病毒病。

（2）在國內(nèi)首次建立了同時檢測病毒性出血性敗血癥病毒、魚傳染性造血器官壞死癥病毒、傳染性胰臟壞死癥病毒三種魚類病毒病的多重熒光PCR檢測技術，同時檢測病毒性出血性敗血癥病毒、魚傳染性造血器官壞死癥病毒、傳染性胰臟壞死癥病毒三種魚類彈狀病毒的多重熒光PCR檢測技術，同時檢測流行性造血器官壞死病毒、真鯛虹彩病毒、錦鯉皰疹病毒三種魚類DNA病毒的多重熒光PCR檢測技術，同時檢測對蝦白斑綜合癥病毒、對蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒兩種蝦病毒的多重熒光PCR檢測技術。

三、社會經(jīng)濟效益

項目在水生動物主要疫病病原快速和實時檢測技術方面填補了國內(nèi)多項空白。建立的16種主要水生動物病毒高通量多重PCR和多重熒光PCR檢測平臺，使整個檢驗周期縮短80 %以上，降低檢測成本50 %以上，大大提高了通關速度，滿足了現(xiàn)代檢驗檢疫方法向高通量發(fā)展的要求。項目成果已經(jīng)廣泛應用于全國質(zhì)檢部門、農(nóng)業(yè)部門、養(yǎng)殖場、漁業(yè)部門等技術執(zhí)法部門和企業(yè)內(nèi)部控制，為質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫部門“守國門”、“把場門”提供了重要的技術手段，成為農(nóng)業(yè)部門開展疫病監(jiān)測計劃的有力工具，在我國防止外來疫病入侵工作中發(fā)揮了重要作用。

截止到2007年，為各級企事業(yè)單位節(jié)省經(jīng)濟費用超過1000萬。利用項目成果開展全國出口魚養(yǎng)殖場和部分養(yǎng)殖場疫情監(jiān)測和流行病學調(diào)查，實現(xiàn)了對水生生物高發(fā)疫病的有效預警和防控，減少了疫病暴發(fā)，所產(chǎn)生的經(jīng)濟效益不可估量。此外，根據(jù)項目成果制訂的水生動物疫病檢測行業(yè)標準和國家標準，在全國范圍廣泛使用，在消除技術性貿(mào)易壁壘，促進水生動物貿(mào)易發(fā)展方面發(fā)揮了重要作用。由于深圳出入境檢驗檢疫局水生動物疫病檢測實驗室在檢測技術方面的突出貢獻，國際動物衛(wèi)生組織（OIE）批準該實驗室成為中國大陸首個OIE魚病參考實驗室（鯉春病毒血癥OIE參考實驗室）。